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上海安亭科学低速台式大容量离心机TDL-5-A低速离心法分离小鼠胚胎干细胞

上海安亭科学低速台式大容量离心机TDL-5-A低速离心法分离小鼠胚胎干细胞

方法:通过上海安亭科学仪器厂生产的TDL-5-A普通低速离心机以600r/min离心6min摔裂小鼠完整囊胚,剥离出未分化的内细胞团,培养鉴定干细胞。

结果:利用低速离心机进行速离心可将内细胞团从完整囊胚中剥离出来,接种在丝裂霉素处理过的饲养细胞上培养时,能在2-3d获得巢状增殖的干细胞集落,且能反复传代、冻存复苏,并保持胚胎干细胞多个标志物的特征。

结论:利用上海安亭科学仪器厂的低速离心机进行摔裂完整囊胚法可获得胚胎f细胞系,且操作方便、经济可行。

饲养层细胞的制备:无菌取出妊娠13—14d的昆明小鼠鼠胚,去头、四肢及内脏后,剪碎成约1 1'1"1/11组织块,2.5g/L胰蛋白酶/体积分数为0.02%室温消化20min后,加入等量PBS自然沉降。

取上层细胞悬液转入含体积分数为10%FBS的高糖饲养层细胞培养基中终止消化,置于低速离心机中离心后去上清,用饲养层细胞培养基重悬后,置于培养瓶中培养,常规消化、传代或冻存备用。当培养瓶中细胞铺满后更换含10111g/LMMC的饲养层细胞培养基,孵育2.5h,PBS洗涤5次,消化后接种于体积分数为0.1% 明胶预处理30 min的培养瓶中培养,即得饲养层细胞。完整囊胚。置于10mL玻璃离心管内,置于离心机中以600r/min离心6 min,重悬细胞,接种于含饲养层细胞的培养瓶内,置于37℃ 、体积分数为5% CO,饱和湿度培养箱中培养。

证明用实验室常规用的离心机直接离心摔裂完整的胚囊是实际可行的,

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